微生物菌剂使用环境安全评价导则（征求意见稿）

溞类繁殖快，生活周期短，培养简便，对许多毒物敏感，因此世界各国广泛使用溞类进行水生生态毒理学研究。
1. 受试化学品必备资料
水溶解度 水溶液中的定量分析法
蒸汽压 在水中和光中的化学稳定性
结构式 正辛醇/水的分配系数
纯度 快速生物降解试验结果
2. 仪器设备
①溶解氧测定仪。
②水硬度计。
③体视显微镜。
④pH 计。
⑤试验容器或装置。试验容器最好是全玻璃制品。或由其他化学惰性材料制成。容积适当，规格一致，便于清洗。
3．数据和报告
目前世界上用于毒性试验的溞类种类很多。常用的种类是：
大型溞 Daphnia magna Straus
蚤状溞 Daphnia pulex Leydig
隆线溞 Daphnia Carinata King
由于大型溞是溞科中个体最大的种类，体长可达6mm，生殖量多，是毒性试验使用最广的一种。国际标准ISO 6341 和我国国家标准GB/T 16125—1995 都把大型溞为准试验动物。
使用大型溞或其他适宜的溞类，试验开始时，溞龄应不超过24h。试验室繁殖、表观健康，有明确来历（繁殖方式、预培养）的溞种才可用于试验。
4. 试验程序
⑴准备
①实验用水：适于培养溞类的任何水，不论是天然水或标准稀释水（见附录），都可用于测试实验。建议在试验前使用的培养水应与试验用水相似，以利于溞类的适应。
标准稀释水应容许溞类在其中生存至少48h，并尽可能检查稀释水中不含有任何已知对溞类有毒的物质，例如：氯、重金属、农药、多氯联苯等。
②受试物溶液配制：取一定体积受试物的贮备液，加入稀释水，定容，制备成经验要求弄得的试验液。
对于受试化学品贮备液的制备，可将已知量的受试物溶于一定体积的稀释水中，贮备液应于
当天配制，对于高稳定性物质，最多允许配置供2d 使用的贮备液。
配置贮备液时，难溶于水的物质可用适当的方法将其溶解或分散，包括采用超声波装置和使
用对溞低毒的有机溶剂、乳化剂和分散剂等物质，并应加设助溶剂对照试验。助溶剂对照组的溶剂浓度应为试验溶液中最高浓度。
对于工业废水，以原水样为试验液（100%），用稀释水按百分数（百分率）配制各浓度。采集废水样品时，应将水样瓶充满水样不留空气，样品采集后应立即进行试验，尽可能缩短水样保存时间，如果样品采集后6h 之内不能进行试验，则必须将水样在0-4℃保存。
对于工业固体废物，首先磨碎，按1：10 比例加入去离子水，摇匀后浸泡24h，滤纸过滤。
其溶解部分为被测工业固体废物的浸出原液（100%），在用稀释水按百分数配制成各浓度。
⑵试验操作
①预试验：在正式试验之前，先进行较大范围浓度系列（如1、10、100mg/L）的初步试验，为正式试验设置受试物体的浓度提供依据。预试验中每个浓度放五只幼溞，持续时间24h（或48h）。用静态方式进行，不设平行组。
②正式试验：根据预试验的结果，在包括使溞全部产生活动抑制的最低浓度和未产生活动抑制的最高浓度之间以几何级数设置浓度系列。一般至少设五个浓度组，如2、4、8、16、32mg/L。
最高试验浓度不应超过1g/L。必须设置空白对照。若使用助溶剂，尚应增设助溶剂对照组，其助溶剂用量同最高浓度组。
每个浓度组和对照组至少要用20 只溞，最好分成4 组，每组五只。试验期间不要喂食。最大负荷为1 只溞/2ml 试验液。试验温度应在（18-20℃）±1℃。光暗周期无特殊要求建议毒性试验在自然光照或相当于自然光照下进行，每天照明10h 左右。
稀释水在加入到受试物中之前曝气。试验开始和结束时，应测定对照组和试验液中溶解氧的浓度。
在试验开始和结束时，应测定对照组和试验液中的;pH 值。不可调节试验液中的pH 值。如有条件，应测定受试物的实际浓度。
试验期间，经常观察溞类的活动与生存情况，应及时取出死溞。记录24h 和48h 溞类累计活动抑制数。最好出现0%、＜50%、＞50%和100%的溞类抑制的试验结果。
5. 质量保证与质量控制
①实验结束时，试验溶液中的溶解氧浓度应高于空气饱和值的60%。
②试验结束时，对照组中活动受抑制溞数应少于10%。
③受试物实测浓度不能低于设置浓度的80%。
④定期测定参比物的24hEC50，以检查供试溞的敏感性。满足参比物重铬酸钾（分析纯）的24hEC50 值≤2.0mg/L，溞敏感度符合要求。
6. 数据处理与报告
⑴数据处理
用表格形式列出24h 和48h 对照组和各处理组试验溞个数、活动抑制溞数个数及百分率。以受试物处理浓度为横坐标，死亡率为纵坐标。在计算机或对数-概率纸上作图，通过图解内插法或计算法求出24h 和48h EC50 估计值，并计算95%的置信限。
⑵结果评价
溞类的毒性可按以下标准分级（表5-3-3）
表5-3-3 溞类急性活动抑制毒性分级标准 

⑶编写报告
报告应包括：试验名称、目的、试验原理、试验的准确起止日期，以及：