C.2.1.1.1.8用玻璃吸管吸取漂浮液,放置于盛有清水的小烧杯中。
C.2.1.1.1.9将此含卵混悬液抽滤于1张滤膜上(滤膜规格同堆肥蛔虫卵检查法)。
C.2.1.1.1.10在显微镜下计算全滤膜上的蛔虫卵数,该数即代表原100mL进料口粪稀中的蛔虫卵数。
C.2.1.1.2司徒(Stoll)氏虫卵稀释计数法:其原理系将定量(重量或容积均可)的稠粪样品,稀释为定量的稀释液,经混合均匀后,从中再吸出一定量的稀释液,在显微镜下,计数其中含有的蛔虫卵。然后按稀释的倍数,计算出该稀释液中的卵数,最后换算成单位重量或容积原样品中含有的蛔虫卵数。具体操作为:
C.2.1.1.2.1用一支100mL硬质玻璃试管,在容水45mL处作一标志或刻度。
C.2.1.1.2.2称取3g搅匀的粪稀样品,装入试管中,注入1/10当量的氢氧化钠溶液至45mL标志或刻度处,另加十数粒玻璃珠。
C.2.1.1.2.3用橡皮塞子紧塞管口后,极力振摇,使成均匀的混合液为止。如样品中含有粪块,最好放置过夜,使有足够的消化时间。
C.2.1.1.2.4翌晨在计数前再把它摇匀。摇后速用1mL刻度吸管,吸取混合液0.15mL于大型载物片(37~75mm)上,盖以22×40mm的盖玻片(如缺大载物片,则将吸出的0.15mL混合液分滴于2~3张一般大小的载物片上,盖以10~18mm的盖玻片亦可)。
C.2.1.1.2.5然后在低倍显微镜下数完0.15mL混悬液中所有的蛔虫卵数,将所数得的卵数乘以100,即为每克粪稀中所含有的蛔虫卵数。
如样品稍稀,不用玻璃试管,改用100mL三角烧瓶亦可,在容积60mL处,刻一刻度,取混匀的粪稀样品4mL于此刻度烧瓶中,注入1/10当量的氢氧化钠溶液,至60mL刻度处,再放入十粒玻璃珠,用橡皮塞紧塞瓶口,极力振摇,直至混合液呈均匀状态为止。然后吸取0.15mL混合液于载玻片上,盖以盖玻片,并在低倍镜下进行蛔虫卵计数,将所得的卵数乘100,即是每毫升粪稀中所含有的蛔虫卵数。
C.2.1.2浓缩法:由于蛔虫卵的比重大于水的比重,在水中容易下沉。沼气池出料口粪稀含水多,粪便较少(水与粪便之比,约为20∶1),因此,含蛔虫卵量相应也少,上层粪稀含卵量当更少。检查时,可采用自然沉淀法和滤膜抽滤法两种方法。分别如下:
C.2.1.2.1自然沉淀法:
C.2.1.2.1.1取出料口上层粪稀3000~4000mL,下层粪稀1000~2000mL,分别用60目铜筛过滤于1~2个2000mL锥形量杯中,让其自然沉淀。
C.2.1.2.1.2经1h后,倒去沉渣上层的液体,另换清水,搅浑后,静置,让其自然沉淀。
C.2.1.2.1.3反复水洗沉淀,至沉渣上面的水接近无色和澄清后,弃去上清液。
C.2.1.2.1.4将沉渣倒人100mL量筒中,测量沉渣的容积。
C.2.1.2.1.5经充分搅拌后,用1mL玻璃吸管,迅速吸取沉渣0.1mL于载玻片上,盖以盖玻片。
C.2.1.2.1.6在低倍显微镜下,作蛔虫卵计数。
C.2.1.2.1.7反复检查几次后,取其平均数,从而推算原100mL粪稀所含有的蛔虫卵数。
C.2.1.2.2滤膜抽滤法:
C.2.1.2.2.1将出料口不同层次采得的定量粪稀样品,用60目铜筛过滤。
C.2.1.2.2.2除比较混浊需要反复水洗沉淀外,可直接抽滤于滤膜上。
C.2.1.2.2.3将滤膜平铺在大型载玻片上,加透明剂后,在显微镜下,作蛔虫卵计数,从而计算出每100mL粪稀中蛔虫卵含有数。
C.2.2粪稀蛔虫卵生活力测定法
C.2.2.1滤膜培养法:将上面进行蛔虫卵计数所用过的滤膜,放在培养皿中,于24~26C下培养一个月,然后从滤膜上刮下沉渣,镜检100~200个蛔虫卵,其中发育到幼虫期者,认为是活卵,其他各期均视之为死卵。
C.2.2.2清水培养法操作如下:
C.2.2.2.1将通过水洗沉淀所得的含卵沉渣,倒入10mL离心管内。
C.2.2.2.2离心3min,每分钟2000转。
C.2.2.2.3倒去上清液,注入饱和食盐水,搅拌后,离心漂浮3min,转速同前。
C.2.2.2.4用毛细吸管吸取液面漂浮物于另一离心管内,加清水,经搅拌后,以如上的转速,离心1~2min。
C.2.2.2.5吸去上清液,再加清水2~4mL搅浑管底的沉淀,加5%福尔马林溶液1~2滴。
C.2.2.2.6置24~26℃温箱中培养一个月,在培养过程中每日换水。
C.2.2.2.7培养完毕,用玻璃吸管吸取沉淀物,做成涂片,在显微镜下观察并计数100~200个蛔虫卵,将发育为幼虫期的,认为是正常的活卵,其他形态者,都认为是不发育卵或死卵。
附录D
粪稀钩虫卵检查法
(补充件)
在粪稀中检查钩虫卵,可以直接从粪稀样品中检查虫卵,或通过培养,间接检获钩虫幼虫。其步骤可分为:
D.1样品处理:参照粪稀蛔虫卵检查法。
D.2粪稀样品显微镜检查:步骤大致同粪稀蛔虫卵检查法。稠的样品用稀释法,稀的用浓缩法。
D.2.1钩虫虫卵的检查
D.2.1.1稀释法:除可采用滤膜法和司徒氏法(参见粪稀蛔虫卵检查法)外,也可采用水洗沉淀法。是因为钩虫卵的比重(1.06)大于水的比重,在水中会逐渐下沉。操作如下:
D.2.1.1.1依粪稀样品稀稠度的不同,称取样品3~5g,放在烧杯中,先加少量清水,充分搅拌均匀,然后陆续加水,使成混悬液。